Fluorescein isotiocyanat , ofte referert til som FITC - uttalt "fit - C,« å rime med " Ditsy " - er en fluorescerende markør som er kjemisk bundet eller konjugert, til andre molekyler som proteiner og antistoffer . Et antistoff konjugert med FITC kan også bli referert til som en " FITC-merket antistoff. " FITC er spent ved lys med en bølgelengde på 488 nm og avgir fluorescerende energi detektert ved 530 nm . En forsker kan se det med et fluorescerende mikroskop eller bruk utstyr som registrerer fluorescerende utslipp og lagrer dem . Metoder

FITC konjugering følger en grunnleggende protokollen . For eksempel vil et antistoff og FITC blandes sammen på et visst forhold i et reagensglass og roteres ved romtemperatur i en time . For å fjerne ubundet FITC fra løsningen , helles den på en affinitets -kromatografi -kolonnen - et glassrør fylt med en perle -liknende gel som vil binde det ukonjugerte FITC . Samtidig vil FITC - merket antistoff strømme gjennom kolonnen og samles til bruk.
Hensyn

Før du starter en konjugering , bør forskeren vurdere flere punkter . Først er FITC svært ustabil , og bør ikke utsettes for lys - den bør holdes i folie -dekket rør til enhver tid. For det andre kan det hende at konjugering tid og temperatur må endres for en temperaturfølsom protein. Endelig kan forskjellige proteiner og antistoffer har forskjellige FITC -bindende kapasitet, så å finne den riktige forholdet mellom antistoff til FITC er kritisk, for lite FITC gjør et antistoff umulig å oppdage og for mye kan endre sin spesifisitet. Av denne grunn bør foreløpige småskala bøyning på ulike prosenter av FITC til antistoff settes opp parallelt. Når det optimale forholdet er etablert, kan den storstilte conjugation utføres.
Bruker

Leger og forskere bruker FITC -merkede antistoffer, hormoner og vekst faktorer i et bredt utvalg av metoder og applikasjoner. For eksempel har en stamcelle som finnes i blodet et molekyl på overflaten kalt CD34 . En lab tekniker kan blande en pasients blod med en FITC-merket antistoff som er spesifikt for CD34 , og kjøre cellene gjennom et strømningscytometer som benytter en laserstråle for å gjøre FITC fluorescens . Deretter skiller cytometeret fluorescerende CD34 celler fra resten av blodlegemer , og legene kan bruke disse isolerte stamceller for terapeutiske behandlinger.